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核酸扩增检测技术(NAT)在血液筛查中的重要性分析
（广元市中心血站
628107）
摘要：
目的: 分析对比核酸检测与 ELISA（酶联免疫吸附试验）检测结果，对血站开展核酸检测在血液筛查的重要性进行探究。方法：以 2014 年 7 月到 2015 年 5 月我站采集的 16808 名献血者血液标本为研究对象，利用 ELASE 法对血样进行 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒螺旋体 TP-抗体检测，对无反应性及谷丙转氨酶（ALT）合格标本进行核酸检测(NAT)，并将 NAT 检测有反应性标本送往中国输血研究所和国家卫生和计划生育委员会临检中心进行确认。结果：16808份样本中 ELASE 法初检和复检均为阴性且 ALT 合格标本 16454 份，经核酸扩增检测技术(NAT)检出 HBV-DNA 阳性标本 27 份。将 27 份阳性血样送往中国输血研究所及国家卫生和计划生育委员会检测，其中溶血拒收 1 份。最终结果为 HBV DNA阳性 9 份，阳性率为 56.25%（9/16），包括隐匿性感染 8 份，窗口期 1 份。结论：核酸扩增检测技术(NAT) 灵敏度较高，可弥补传统的酶联免疫吸附试验 ELASE 法的缺陷，减少对窗口期病毒或变异病毒漏检的可能，降低了临床用血的风险，可以推广应用于血站血液的筛查。
关键词：无偿献血；ELASE；核酸扩增检测技术(NAT)；血液筛查；
输血广泛应用于临床，无论是外伤大出血、产后大出血、术中出血等血容量不足时需要血液供给，某些血液方面的疾病如血友病、镰状细胞性贫血、严重贫血、骨髓造血减弱或抑制、血小板减少症等疾病都需要给予血液治疗[1]。我国是乙肝大国，而艾滋病、丙肝、梅毒等传染性疾病也在迅速发展[2]，由于血站采集血液通过多途径获得，且各人血液有所差异，因此血站血液筛查至关重要，尤其是 HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体、谷丙转氨酶（ALT）的筛查，以避免输血相关性疾病的发生。然而由于 HBV、HCV、HIV 病毒的窗口期、隐匿性感染以及病毒可能发生的变异，传统的血清学筛查方式- ELASE 法，漏检率较高，降低了临床用血的安全性。核酸作为 HBV、HCV、HIV 病毒的遗传物质，其在供血
者机体针对病毒微生物产生特异性抗体并释放到外周血之前就已存在，因此核酸检测可大大提高 HBV、HCV、HIV 病毒的检出率。鉴于此，为了提高临床用血质量，降低输血传播疾病风险，本文根据我站开展核酸检测后的情况，分析核酸扩增检测技术(NAT)在血液筛查中的重要性。
1 资料和方法 1.1 一般资料
1.1.1 血样来源
从 2014 年 7 月到 2015 年 5 月我站 16808 名无偿献血者，年龄 19 至 55岁，平均年龄为（31.2±2.5）岁，通过健康咨询，并按照国家卫生和计划生育委员会《献血者健康检查标准》体检合格，经乙肝表面抗原金标试纸条快速筛查 HBsAg 阴性，ALT 试纸条筛查 ALT<50U/L，硫酸铜比重法测量血红蛋白，筛查结果均符合要求。
1.1.2 血样采集
所有献血者肘静脉取血采集血样，分别放置于 2 支以乙二胺四乙酸抗凝的 5ml 真空采血管中，第 1 管不含分离胶，取血样用于酶联免疫检测，第 2 管含分离胶，用于核酸扩增检测，且核酸检测管与采血后 4h 内 4℃低速离心，离心力 1600g，离心时间 20min，然后保存于 2~8 摄氏度冰箱中。
仪器与试剂
仪器：低温离心机、Star 全自动加样仪、FAME 全自动酶免检测仪、罗氏 COBAS201AmpliPre 全自动核酸提取系统、CTM 核酸扩增检测系统。
试剂：ELISA 检测试剂：HBV 初检(北京万泰)、HCV 初检(北京万泰)HIV初检(北京万泰)HBV 复检(法国伯乐)、HCV 复检(索林)HIV 复检(法国伯乐)核酸检测试剂：罗氏配套 HBV、HCV、HIV 联合检测试剂（罗氏公司）
1.3 检测方法 1.3.1 酶联免疫检测
血液采集离心后，经 Star 全自动加样仪加样，于 FAME 自动酶免检测仪检测，项目包括 HBsAg、HCVAg/Ab、HIVAg/Ab,TP 抗体，且初检和复检检测由不
同的检测人员采用两种试剂完成。
1.3.2 核酸扩增检测
按标准操作规程进行试剂及耗材准备，经 ELASE 初检复检合格的标本，严格按照标准操作规程，离心 20min（离心力 1600g），于全自动核酸检测系统逐步完成核酸提取、扩增与检测。
1.3.3 结果确认
对核酸扩增检测阳性标本留取血浆，将血样送往中国输血研究所和国家卫生和计划生育委员会临检中心进行确认。
2.结果 2.1 ELASE 检测结果
16808 份样本中 ELASE 法初检和复检阳性 654 份，其中乙肝表面抗原（HBsAg）阳性 88 份，血清反应性比率为 0.52%（88/16808），HCV 抗体阳性 15份，血清反应性比率为 0.09%（15/16808）；HIV 抗体阳性 6 份，血清反应性比率为 0.03%（6/16808）梅毒螺旋体 TP-抗体阳性 215 份，血清反应性比率为 1.28%（215/16808）、谷丙转氨酶（ALT）>40U/L330 份，血清反应性比率为 1.96%（330/16808），见表 1：
2.3 ELASE 检测与核酸扩增检测技术(NAT)检测对比
应用核酸扩增检测技术（NAT）后 HBV 检出率分为 0.684%较单独 ELASE法 0524%的检出率明显提高，见表 4：
3.讨论
输血是感染 HBV、HCV、HIV、TP 的主要途径之一，输血相关性疾病也越来越受到社会的广泛关注，因此为降低经输血传播疾病风险，保证血液及血液制品的质量，国家对血液检测的要求越来越严格。目前国内检测 HBsAg、抗—HCV、抗—HIV 多采用第 3 代 ELASE 试剂，虽然该方法的灵敏度和特异性较高，但是依靠外周血中特异性抗原、抗体对 HBV、HCV、HIV 病毒进行检测，需要避开其空
窗期，而 HBV、HCV、HIV 病毒空窗期较长，一般为 45-46d、72d、22d，并且病毒存在变异的可能，易导致漏检。核酸扩增检测技术(NAT）是一种从核酸水平进行病毒筛查的手段，敏感性高, 可检出标本中极微量的核酸,从而大大缩短 HBV、HCV、HIV 病毒检测的“窗口期”。虽核酸扩增检测技术（NAT）自上世纪 90 年代开始，已被欧美、日本等发达国家的输血机构所普遍应用，但我国血站机构核酸检测技术应用起步较晚[3]，对开展 NAT 检测正处于摸索、熟悉、推广阶段。
本文通过对我站同时开展 ELISA 检测和核酸检测后的情况分析发现，16808份样本中 ELASE 法初检和复检阳性标本654份，其中乙肝表面抗原（HBsAg）阳性 88 份，血清反应性比率为 0.52%，HCV 抗体阳性 15 份，血清反应性比率为0.09%（15/16808）；HIV 抗体 6 份，血清反应性比率为 0.04%（6/16808）,这表明ELASE 在血液筛查中具有很高的应用价值。ELASE 法初检和复检阳性均为阴性16154 份，经核酸扩增检测技术(NAT)检测出 36 份 HBV-DNA 阳性标本，检出率0.223%(37/16154)，检出率高于青海地区 0.068%[4]和常州地区 0.1%[5]，这可能是因为地区差异及我站使用的罗氏核酸检测二代试剂灵敏度较一代试剂提高的原因。未检出 HCV、HIV 核酸阳性标本，可能由于 HCV、HIV 感染率较低及其核酸物质为 RNA 对环境温度等要求较高，稳定性较差，易降解[6]。36 份阳性血样送往中国输血研究所和国家卫生和计划生育委员会临检中心检测，最终结果为HBV DNA 阳性 27 份，确认阳性率为 72.97%（27/37）。应用 NAT 技术 HBV 检出率为 0.684%，较 ELASE 的 0.524%，有显著提高，提示 NAT 敏感性较高，能有效缩短出 ELISA 漏检标本的窗口期，提高实验室对处于窗口期、静默感染等状况标本的检出率，说明核酸扩增检测技术(NAT)在血液筛查应用及保证临床输血安全中的重要性。
综上所述，核酸扩增检测技术(NAT)在血液筛查中的的重要性不可小觑，对于提高血液的安全性有较高的应用价值，值得推广应用。
参考文献:
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[5] 何亚琴，张建伟，杨爱龙，濮云峰，庄华. 核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用.
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